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PCR儀的一些相關(guān)知識(shí)介紹

更新時(shí)間:2020-11-14      瀏覽次數(shù):1878
  PCR是聚合酶鏈反應(yīng)的簡(jiǎn)稱,是在短時(shí)間內(nèi)體外大量擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。自動(dòng)完成聚合酶鏈反應(yīng),提供DNA擴(kuò)增的溫度條件而設(shè)計(jì)的儀器稱為PCR儀。
  
  PCR儀主要用于DNA片段的放大,可將DNA分子或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍,在這過(guò)程中主要是3個(gè)特征溫度循環(huán):
  
  1、高溫變性:把樣品加熱至90~95℃讓DNA模板變性變成單鏈。
  
  2、低溫退火:讓樣品的溫度迅速下降至50~65℃,引物就可以結(jié)合到模板上去。
  
  3、適溫延伸:讓樣品的溫度上升至70~75℃,DNA聚合酶就可以從引物開始用底物復(fù)制出新鏈。
  
  因此,在PCR反應(yīng)過(guò)程中對(duì)溫度控制的要求很高,良好的溫度控制是PCR儀質(zhì)量好壞的關(guān)鍵。
  
  基因擴(kuò)增的基本要素:
  
  1、DNA模板:待拷貝的DNA稱為模板,它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA,Z后擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。
  
  2、引物:是DNA復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過(guò)程中的晶核,引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
  
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復(fù)制的動(dòng)力,在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。
  
  4、緩沖液:提供DNA合成反應(yīng)所需的pH,離子強(qiáng)度等環(huán)境。
  
  5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
  
  PCR儀用途:
  
  1、醫(yī)學(xué)和健康檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)臨床診斷,用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷以及基因復(fù)制。
  
  2、DNA鑒定,常見(jiàn)于司法鑒定領(lǐng)域。
  
  3、臨床分子診斷試劑和生物試劑公司藥品研發(fā)。
  
  4、轉(zhuǎn)基因、微生物、動(dòng)物源性成分檢測(cè),常見(jiàn)于醫(yī)藥衛(wèi)生及農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)領(lǐng)域。
  
  2、引物:是DNA復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過(guò)程中的晶核,引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
  
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復(fù)制的動(dòng)力,在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。
  
  4、緩沖液:提供DNA合成反應(yīng)所需的pH,離子強(qiáng)度等環(huán)境。
  
  5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。

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